×
اطلاعات بیشتر باشه، مرسی برای ارائه بهترین تجربه کاربری به شما، ما از کوکی ها استفاده میکنیم

gegli

میکروبیولوژی

علم روز

× سلام .ماندانا هستم.امیدوارم از این وبلاگ استفاده ی بهینه را ببرید.نظر یادتون نره.ممنون
×

آدرس وبلاگ من

elmerooz.goohardasht.com

آدرس صفحه گوهردشت من

goohardasht.com/mandanaa

لیست دوستان

مطالعه ژنتیکی گونه های بیماریزای لیشمانیا در ایران از طریق همسانه سازی و تعیین ترادف دی.ان.ای حلقوی کوچک میتوکندریایی جهت بهبود تشخیص ملکولی از طریق پ

موسسه‌ی تصویب‌کننده: مرکز تحقیقات کاربردی دارویی دانشگاه علوم پزشکی تبریز

در دو دهه اخیر، مطالعات ژنتیکی موجودات مختلف از طریق همسانه‌سازی و تعیین ترادف نوکلئوتایدی نسبی و یا کامل ژن‌(ها)، ژنوم و یا نواحی خاصی از ژنوم مورد توجه تعداد بسیار زیادی از دانشمندان بوده و پروژه‌های بیشماری با صرف میلیاردها دلار در این زمینه اجرا شده و یا در حال اجرا هستند. شناسایی دقیق عوامل بسیاری از بیماری‌های ژنتیکی و به‌خصوص عفونی از این طریق ممکن شده است. هنوز اطلاعات جمع‌آوری شده در پایگاههای بسیار وسیع داده‌های ژنتیکی در مقایسه با فقدان اطلاعات لازم در رابطه با رمزگشایی ژن‌ها و ژنوم‌های موجود خیلی اندک هستند. وجود تنوع بسیار وسیع ژنتیکی در بین ژن‌های مشابه متعلق به گونه‌های مختلف موجودات و اختلاف موجود در ترادف این ژن‌ها و دیگر قطعات خاص ژنومی مطالعات مبسوطی را ایجاب می‌نمایند. چنین یافته‌هایی را می‌توان در جهت رده‌بندی و شناسایی موجودات به‌کار برد (Mahmoudpour, 2002). این یافته‌ها علاوه بر متحول ساختن علوم بیولوژیکی، پایه و اساس طراحی پرایمرهای لازم جهت انجام واکنش زنجیره‌ای پی‌سی‌آر هستند. روش پی‌سی‌آر کاربرد وسیعی را در تحقیقات بیولوژیکی دارا بوده که تشخیص و ردیابی مولکولی بخش عمده‌ای از آن را به‌خود اختصاص می‌دهد. در رابطه با لیشمانیا، ترادف تعداد بسیار اندکی از ژن‌ها تعیین شده است. با این وصف، داده‌های زیادی در رابطه با تعیین ترادف دی.ان.ای کوچک حلقوی (mini circle DNA) موجود در میتوکندری‌های آن در بانک‌های اطلاعاتی انباشته شده است. این دی.ان.ای که موسوم به kDNA یا دی.ان.ای کاینِتوپلاسمیک (kinetoplasmic DNA) است به‌طول چند صد نوکلئوتاید بوده و به تعداد 10 هزار تا 20 هزار نسخه در هر سلول یافت می‌گردد. کِی.دی.ان.ای در بین گونه‌ها و ایزوله‌های لیشمانیا از تنوع ژنتیکی معنی‌داری برخوردار بوده و تا کنون هیچگونه ایفایش خاص ژنتیکی به آن اختصاص داده نشده است. بنا به کثرت این مولکول به‌طور گسترده‌ای در دنیا جهت استفاده در تشخیص مولکولی از طریق پی‌سی‌آر استفاده شده است، زیرا تعدد آن در هر سلول منجر به افزایش حساسیت پی‌سی‌آر در امر ردیابی لیشمانیا می‌گردد et al, 2003) (Ikonomopoulos فراوانی گزارشات و مقالات بیشمار منتشر شده در زمینه ردیابی لیشمانیا از طریق پی‌سی‌آر و استفاده از ترادف کی.دی.ان.ای جهت طراحی پرایمرهای مربوطه دالّ بر تنوع ژنتیکی وسیع این دی.ان.ای در بین گونه‌ها و جمعیت‌های یک گونه است (به لیست منابع گزیده شده مراجعه شود). تنوع بسیار در پرایمرهای استفاده شده و تناقض موجود در نتایج و بحث این گزارشات، دلیل بارزی بر وجود اختلاف ژنتیکی در جمعیت‌های مختلف موجود در دنیا است. زیرا پرایمرهای به‌کار رفته در منطقه‌ای از کارایی مؤثری در منطقه دیگر برخوردار نمی‌باشد. به‌عبارت دیگر، پرایمرهای طراحی شده از ترادف نوکلئوتایدی مربوط به جمعیتی ممکن است در تشخیص و ردیابی جمعیتی دیگر کارایی لازم را نداشته باشد. بنابراین در استفاده از این مولکول برای طراحی روش تشخیصی پی‌سی‌آر بهتر است تا ترادف مربوط به آن در جمعیت موجود پاتوژن به‌طور دقیق تعیین بگردد(Lachaud et al, 2000; Lachaud et al, 2002). . اکثر داده‌های موجود در رابطه با ترادف کی.دی.ان.ای از نقاط مختلف دنیا به‌صورت نیمه‌کامل بوده و تعداد کمی از آنها نمایانگر ترادف کامل می‌باشند. این امر احتمالاً به دلیل مشکلات موجود در همسانه‌سازی طول کامل کی.دی.ان.ای بوده است. به‌عبارت دیگر، ممکن است انجام برش آنزیمی جهت همسانه‌سازی، منجر به از دست دادن قطعه‌ای کوچک از این دی.ان.ای شده است. طی مطالعات انجام شده در پروژه "بهینه‌سازی ردیابی گونه‌های لیشمانیا از طریق پی‌سی‌آر به‌منظور طراحی کیت تشخیصی"، با استفاده از نواحی حفاظت شده کی.دی.ان.ای مربوط به ترادف‌های تعیین شده در کشورهای خارج پرایمرهایی طراحی شدند که قادر هستند در صورت وجود هومولوژی در گونه مورد نظر، باعث تکثیر طول کامل کی.دی.ان.ای بگردند (محموپور، داده‌های منشر نشده). صرفنظر از عدم کارایی کافی این پرایمرها در ردیابی مقادیر اندک لیشمانیا، خوشبختانه، کاربرد این پرایمرها نشان داد که قادر هستند تا کی.دی.ان.ای مربوط به چهار گونه پاتوژنیک لیشمانیا در ایران از جمله L. infantum، L. major، L. donovani و L. tropica را با موفقیت تکثیر نماید. نمونه‌های این گونه‌ها که توسط انستیتو پاستور ایران تعیین هویت شده‌اند توسط آقای دکتر فرج‌نیا ارایه شدند. اختلافی که در طول قطعات تکثیر شده این گونه دیده می‌شود، دالّ بر تنوع ژنتیکی موجود می‌باشد. تعیین دقیق این تنوع و نشان دادن میزان هوموژنیستی و هتروژنیستی موجود بین جمعیت‌های مربوط به این گونه‌ها در ایران و در مقایسه با داده‌های بین‌المللی، علاوه بر ارایه گزارش علمی ما را قادر خواهد ساخت تا با طراحی پرایمرهای اختصاصی نسبت به ردیابی مؤثرتر لیشمانیا از طریق پی‌سی‌آر اقدام نماییم (محموپور، داده‌های منشر نشده). با وجود اینکه کیت تشخیصی لیشمانیا به طریق پی‌سی‌آر توسط شرکت سیناژن طراحی و عرضه شده است، استفاده از این کیت و نیز استفاده از پرایمرهای منتشر شده خلاء و نیاز موجود در امر تشخیص و ردیابی لیشمانیا در ایران را برطرف ننموده است، زیرا قادر نبوده‌اند تا بنا به اختلاف ژنتیکی موجود، حساسیت قابل قبولی را ارایه دهند. قابلیت پی‌سی‌آر در این موارد صرفاٌ تشخیص مولکولی سلول‌های لیشمانیا بعد از امر جداسازی و کشت‌ میکروبی تحت شرایط آزمایشگاهی بوده است. ردیابی مقادیر اندک این پاتوژن از طریق پی‌سی‌آر در ایران چندان موفقیت‌آمیز نبوده است. به این دلیل، روش‌های مختلف سرولوژیکی که از حساسیت محدودی برخوردار هستند متداول بوده و استقبال شده‌اند. استفاده از کیت تشخیصی سیناژن در پروژه گذشته، مطابق پروتکل ارایه شده از ردیابی سلول‌های کشت شده نیز عاجز بوده و روش آداپت شده در آن پروژه استفاده از کیت مزبور را بهینه‌سازی نمود. عدم دسترسی به متدهای حساس و پیشرفته برای تشخیص و شناسائی انگل لیشمانیا در مراحل اولیه آلودگی باعث عدم تشخیص بموقع بیماری می‌شود. تشخیص انگل از طریق علائم بالینی وقتی صورت می‌پذیرد که بیمار راه چندانی تا مرگ فاصله ندارد. متدهای شناسائی از طریق نمونه‌گیری مغز استخوان یا بیوپسی اعضای مبتلا مانند طحال و جگر روش‌هایی هستند که موجب اذیت زیاد بیمار شده و علاوه بر عدم سرعت عمل مستلزم هزینه‌های گزافی هستند. روش‌های سرولوژیکی که متداولتر هستند از حساسیت زیادی برخوردار نبوده و منوط به افزایش سطح آنتی‌بادی‌های اختصاصی می‌باشند. در افرادی که دارای اختلالاتی در سیستم ایمنی هستند، امکان نتایج منفی کاذب و عدم تشخیص انگل وجود دارد. گذشته از این بیماری باید در مراحل بسیار پیشرفته‌ای باشد تا ردیابی آنتی‌بادی‌های موجود امکان‌پذیر گردد. نظر به تشکیل گروه تحقیقاتی لیشمانیا در این مرکز و بنا به افزایش سطح آلودگی و شیوع نسبی آن در منطقه، مطالعات گسترده مولکولی در جوانب مختلف این انگل و بیماری مربوطه اجتناب ناپذیر است. چنین مطالعاتی ناگزیر است تا به روش شناسائی پیشرفته و مقرون به‌صرفه‌ای مجهز گردد. به عبارت دیگر، انتظار نمی‌رود تا پایه چنین تحقیقاتی را بر استفاده از کیت‌های تجارتی پرهزینه و با ماهیتی نامعلوم استوار نمود. یعنی نمی‌توان بر یک سری پروتکل‌های بسته‌بندی شده و ناشناخته متکی شد.

دوشنبه 11 فروردین 1387 - 1:04:47 PM

ورود مرا به خاطر بسپار
عضویت در گوهردشت
رمز عبورم را فراموش کردم

آخرین مطالب


پودر چاق کننده ۱۰۰ % تضمینی و بدون بازگشت


wellman


گریم صورت آموزش نکنه به نکته)


چند نکته که برای زیبایی باید از آنها اجتناب کرد


اثرات مفید بامبو در سلامتی


نکات مهمی درباره قرص سرماخوردگی بزرگسالان


بهترین مکمل ورزشی برای رشد


موز بهترین ضماد زخــم


رها کردن وسواس باعث عود بیشتر این بیماری می شود


هوای سرد خطر سکته را افزایش می دهد


نمایش سایر مطالب قبلی

پیوند های وبلاگ

آمار وبلاگ

297557 بازدید

28 بازدید امروز

92 بازدید دیروز

435 بازدید یک هفته گذشته

Powered by Gegli Social Network (Gohardasht.com)

آخرين وبلاگهاي بروز شده

Rss Feed

Advertisements